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培训课件:蜜蜂检疫技术

发布时间:2017-03-13文章来源:贵州省动物卫生监督所作者:王顺海阅读:235

蜜 蜂 检 疫 技 术 

--四川省蜂业管理站  王顺海(高级畜牧师)


 

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第一部分  蜜蜂生物学基本知识

 

一、蜜蜂群体:蜂群组成

蜜蜂的一个群体。由蜂王、工蜂和雄蜂组成。蜂王通常每群只有一只;工蜂自数千至数万只不等,雄蜂一般只在群体需要的季节里才存在。

蜂王  Queen  Bee

雄蜂  Drone Bee

工蜂  Worker Bee

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二、蜜蜂个体形态

成年蜜蜂的外部形态

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蜜蜂卵 蜜蜂小幼虫 蜜蜂大幼虫

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蜜蜂子脾(封盖子脾)

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蜜蜂蜜脾

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蜜蜂个体发育历程

¤蜜蜂个体发育:卵-幼虫-蛹-成蜂

 

第二部分 蜜蜂病虫基本知识

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主要检疫对象

¤  美洲幼虫腐臭病、欧洲幼虫腐臭病、蜜蜂孢子虫病、蜂螨病、白垩病

美洲幼虫腐臭病

¤  美洲幼虫腐臭病(American foulbrood),简称美幼病,是美洲幼虫腐臭病是目前危害蜜蜂幼虫生长的主要细菌病。被感染的蜜蜂幼虫平均在孵化后12.5天表现出症状,首先体色明显变化,从正常的珍珠白变黄、淡褐色、褐色甚至黑褐色,同时虫体不断失水干瘪,最后成紧贴于巢房壁的、黑褐色的、难以清除的鳞片状物。该病于1907年确定,目前广泛发生于温带与亚热带地区的几乎所有国家,给这些国家的养蜂业带来了严重的经济损失。我国于1929~1930年间引进日本西方蜜蜂蜂种时将该病带入。美洲幼虫腐臭病的病原具有极强的生命力,在曾经暴发美幼病的养蜂主产区普遍存在。

病原鉴定

¤  对于幼虫芽孢杆菌的鉴定,早些时候一般先对其进行分离培养,然后进一步通过生化手段进行鉴定。但是由于幼虫芽孢杆菌芽孢的生长比较特殊,它需要复杂的营养,在普通培养基上不能萌发也不能形成芽孢,需要专用的培养基,而且它的生长速度很慢,所以这样的方法显然比较花时间,而且还要依赖后面一系列复杂的生化方法。

¤  于是就有人试图发展一种选择性培养基,希望通过分离培养就能鉴定出幼虫芽孢杆菌,而不再需要接下来的生化鉴定。在这些探索中比较成功的是Alippi在1995年发明的一种半选择性培养基。他在培养基中加了萘啶酮酸和pipennedic酸,由于幼虫芽孢杆菌的生长比较特殊,它可以在加了萘啶酮酸和pipeMedic酸的培养基上生长,而其他大多数细菌则不能,从而可以将它们分离开。虽然这种方法相对比较简便,但是却不可避免的存在一定的假阳性现象。在此基础上,在1999年,Govan V A 等报道可以使用PCR技术来分辨培养时出现的真假阳性,从而增加了上述方法的可信度间。

¤  1999年,Stahly等从NE株系的幼虫芽孢杆菌中分离得到了幼虫芽孢杆菌噬菌体的致命性突变体PPLlc,并且证实幼虫芽孢杆菌的几乎所有株系都对PPLlc敏感,而其他细菌对PPLlc有抗性。这样就使幼虫芽孢杆菌培养后的鉴定变得更加简单方便了,只要看是否有噬菌斑的出现就可以了。

¤  但是上述这些方法的使用都需要幼虫芽孢杆菌的培养,而前面已经提到幼虫芽孢杆菌的培养是比较麻烦的,PCR技术的使用就克服了这一困难,它可以不需要经过培养,就能直接对蜂蜜中的芽孢进行鉴定。

¤  2001年,Dobbelaere W等发展了一种以16Sr—RNA的编码基因为引物的PCR技术来鉴定幼虫芽孢杆菌的方法,实验证明该方法快速、可靠,在4小时内就能做出正确的诊断。此后,Piccini C 等(2002)、Bakonyi T 等(2003)、AlipPi A M 等(2004)也相继报道了可以使用PCR技术对蜂蜜中的芽孢进行快速直接鉴定。通过这些PCR技术的改进和引物的改良,现在我们已经可以在蜜蜂幼虫尚未发病的时候检测出低含量的芽孢,从而能够防患于未然,控制美洲幼虫腐臭病的大规模流行。

症状鉴定

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欧洲幼虫腐臭病(欧幼病)

1. 病原:蜂房球菌(Melissococcus pluton)

2. 症状:通常病虫在4~5日龄死亡 ,虫体肿胀,环纹模糊,变色 。

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蜜蜂孢子虫病 Nosema disease


¤  发生情况: Zender(1909)第一次证实在成蜂消化道上皮细胞中发现的小球体是寄生性的小孢子,小孢子能引起的病为孢子虫病。目前在全世界的西方蜜蜂上都存在。在我国,孢子虫病也广泛分布,且发病率较高,经常与其他病原物一起侵染蜜蜂,造成并发症,给蜂群带来很大损失。孢子虫不但侵染西方蜜蜂,也侵染东方蜜蜂,但东方蜜蜂尚未见流行病。

¤  病原: Zender将引起孢子虫病的小孢子称之为孢子虫(Nosema apis)。孢子大小约3~8X l~3 um,椭圆形,米粒状,在显微镜下带蓝色折光, 孢子内藏卷成螺旋形的极丝。

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症状

1、被孢子虫侵染的蜜蜂无明显的外观的疾病症状(腹部略膨大)。

2、解剖被侵染蜜蜂则可发现,中肠由蜜黄色变为灰白色,环纹消失,失去弹性,极易破裂。

3、春季及夏季,蜂群中被孢子虫侵染的蜜蜂的寿命只有健康个体的一半;被侵染的笼蜂寿命缩短10%~40%。

4、并且患病个体的王浆腺发育不完全,影响了对幼虫的哺育。

5、冬季病蜂会下痢,早衰,寿命缩短。

6、雄蜂及蜂王对孢子虫也敏感。

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诊断

由于病蜂在外观上没有明显的症状,诊断依靠:

(1)解剖蜜蜂,拉出中肠,观察中肠的颜色,弹性,环纹,病蜂中肠灰白,失去弹性,环纹消失。

(2)挑取病变中肠组织一小块,置载玻片上,滴加适量蒸馏水,盖上盖片,轻压,显微镜400~600倍镜检,检查孢子的存在。

 

白垩病 Chalkbrood

¤  发生情况:  Massen(1913)在德国第一次报道了对白垩病的观察。主要分布于欧洲、北美洲、亚洲及新西兰。我国于1990年发生,1991年首次报道,已列为蜜蜂进口的检疫对象。目前在全国范围流行,侵染西方蜜蜂三型蜂的幼虫,危害严重。

¤  病原: 蜜蜂球囊霉蜜蜂变种(Ascosphaera apis var.apis)(模式变种)和蜜蜂球囊霉大孢变种(Ascosphaera major)

¤  症状: 患白垩病的幼虫在封盖后的头两天或在前蛹期死亡。幼虫被侵染后先肿胀,微软,后期则失水缩小成坚硬的块状物。当只有一个株系(十或一)感染幼虫时,死亡的幼虫残体为白色粉笔样物;当二个株系共同在幼虫上生长时,死虫体表形成子实体,干尸呈深墨绿色至黑色。在蜂群中雄蜂幼虫比工蜂幼虫更易受到感染。

      在重病群中,可能留下封盖房,但为零散的,封盖房中有结实的僵尸,当摇动巢牌时能发出撞击声响。

¤  传播: 蜂群内的传播主要是孢子,孢子的抗性极强,至少能在自然条件下存活35年。菌丝体也能直接侵染幼虫,若用被污染的巢脾生产的巢础带有真菌孢子,巢础也可成为传染源。

            群间传播可能是飞扬的孢子,也可能是别的种类的蜂

症状

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诊断

(1)通过典型的症状诊断。

(2)取回干虫尸,刮取体表黑色物,置载玻片上做水浸片,显微镜400倍观察,根据真菌孢囊及孢子球,孢子的形态确定病原菌。

 

 

蜂 螨 病

¤  侵袭性螨害是蜜蜂最重要的危害之一。目前从蜜蜂属的蜂体上已发现7种蜂螨。

¤  侵袭蜜蜂的螨类主要有:

      狄斯瓦螨 Varroa destructor Anderson & Tureman,属寄螨目,瓦螨科。别名:大蜂螨、瓦螨,蜜蜂体外寄生螨。

      小蜂螨    Tropilaelaps   clareae.小蜂螨:属寄螨目、厉螨科。别名:小螨。

¤  危害:

    我国大蜂螨于1955年首次在江浙一带发现,当初螨危害有限,没有引起足够的重视。 1960年以后,除了转地蜂群从未到达的边远地区外,大蜂螨已迅速蔓延到全国各地,已成为我国养蜂业难以根除的历史病害。

    小蜂螨1961年首次在菲律宾的东方蜜蜂标本上发现,后在蜂箱附近的野鼠上也找到这种螨。小蜂螨分布范围比大蜂螨小,除亚洲一些国家外,非洲、美洲、欧洲和大洋洲均未见报道。寄主较广泛,已知可在蜜蜂属的东方蜜蜂、西方蜜蜂、大蜜蜂、黑色大蜜蜂、小蜜蜂上寄生。


狄斯瓦螨 Varroa destructor Anderson & Tureman

¤  属寄螨目,瓦螨科。别名:大蜂螨、瓦螨,蜜蜂体外寄生螨。

    大蜂螨害的主要症状:大蜂螨不仅寄生在成年蜂体上吮吸其体液(血淋巴),使蜜蜂体质衰弱,烦躁不安,影响其哺育繁殖,外勤采集和本身的寿命,而且更主要是潜入蜜蜂封盖的子房内产卵繁殖,吮吸幼虫和蛹的血淋巴液,造成大量被害虫蛹不能正常发育而死亡;或幸而出房,也是翅足残缺,失去飞翔能力,危害严重的蜂群,群势迅速下降,子烂群亡。

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形态特征

¤  雌成螨呈横椭圆形,深红棕色,长1.11~1.17mm,宽1.60~1.77mm。

    大蜂螨的卵、若虫

 

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小蜂螨    Tropilaelaps   clareae

¤  属寄螨目、厉螨科。别名:小螨。


小蜂螨的危害症状

¤  小蜂螨主要寄生在子牌上,很少出现在巢牌外的蜂体上。寄生主要对象是封盖后的老幼虫和蛹。它们靠吸食幼虫和蛹体汁液进行繁殖,经常造成幼虫无法化蛹,或蛹体腐烂于巢房。幸而出房的幼蜂也是残缺不全。受危害幼虫,其表皮破裂,组织化解,呈乳白色或浅黄色,但无特殊臭味。由于小蜂螨发育期短,有的新成螨会咬破房盖转房再行繁殖危害,从而使房盖会出现形如缝衣针孔状大小的穿孔。

¤  小蜂螨繁殖速度比大蜂螨快,造成烂子也比大蜂螨严重,若防治不及时,极易造成全群烂子覆灭。


雌成螨

¤  雌螨呈卵圆形,浅棕黄色,前端略尖,后端钝圆,体长0.97mm,宽0.49mm。螫钳具小齿,钳齿毛短小,呈针状。头盖小不明显,呈土丘状。须肢叉毛不分叉。背板覆盖整个背面,其上密布光滑刚毛。胸板前缘平直,后缘强烈内凹,呈弓形。前侧角长,伸达基节Ⅰ、Ⅱ之间。

¤  生殖腹板狭长,达到或几乎达到肛板的前缘,长宽为596.7um和117.5um。后端平截,具刚毛一对。肛板前缘纯圆,后端平直,长宽各为230um和150um,具刚毛三根。气门沟前伸至基节I、Ⅱ之间。气门板向后延伸至基节IV后缘。腹部表皮在基节IV之后密布刚毛,毛基骨板骨化强,呈棱形。

雄成螨

雄螨呈卵圆形,淡黄色。体长0.92mm,宽0.49mm。螫钳具齿。导精趾狭长,卷曲。头盖呈土丘状。须肢叉毛不分又,背板与雌螨相似。生殖腹板与肛板分离,具5对刚毛和2对隙状器。肛板卵圆形,前端窄,后端宽圆,具3根刚毛。气门沟伸至基节I、Ⅱ之间。气门板向后延伸至基节Ⅳ后缘。在基节Ⅳ之后的腹部表皮刚毛与雌螨相似。

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¤  卵近圆形,腹部膨大,中间稍下凹,形似紧握的拳头,卵膜透明,长0.66mm,宽0.54mm。

若螨

¤  卵孵化后的幼螨很快变成前期若螨。前期若螨呈椭圆形,乳白色,长0·54mm,宽0.38mm,体背有细小的刚毛。

¤  后期若螨为卵圆形,长0.90mm,宽0.61mm,体背着生细小刚毛,排列无一定顺序。

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检疫准备

¤  检疫人员须身着浅色工作服,戴面罩和养蜂手套,身上不能带有酒精、芳香型等刺激性气味。

¤  检疫前要准备镊子、放大镜、酒精等药物器具,并将器具消毒。

检疫注意事项

¤  开箱时要站立在蜂箱旁。提脾时要轻、稳、准,巢脾保持在蜂箱正上方

现场蜜蜂检疫

¤  箱外观察

¤  箱内检查

箱外观察

¤  察蜜蜂采集飞行情况。      

¤  检疫人员观察蜜蜂飞行速度、盘旋、高度、声音,是否有烦躁追人、畜等异常情况。

¤  观察巢门及附近场地上的蜜蜂行为,有无急躁、不安表现、有无爬蜂、下痢现象,观察蜜蜂的体色光泽、腹部形态、翅膀排列、动作、翅膀有无脱落、躯体绒毛等。观察蜂场场地上有无残翅残足蜜蜂、死蜂。

¤  观察蜂箱巢门口的蜜蜂进粉和进蜜情况。

箱内检查

¤  检疫人员轻轻打开蜂箱外盖和内盖(纱盖),观察蜂箱内的蜜蜂行为是否异常。有无急躁、不安表现,有无爬蜂,有无大肚蜜蜂和下痢现象,观察蜜蜂的体色光泽、腹部形态、翅膀排列、动作,翅膀有无脱落。观察蜂箱内有无残翅残足蜜蜂、死蜂。

¤  轻轻提出封盖子脾,用放大镜观察蜜蜂身体上有无大蜂螨。

¤  将封盖子脾上的蜜蜂抖入蜂箱内,观察子脾的密实程度,有无“插花子脾”现象;检查封盖子脾房盖有无穿孔、塌陷。观察有无死蛹。

¤  将封盖子脾一面对准阳光,用镊子挑开即将出房的封盖子的房盖,挑出蜂(蛹),查看房内蛹体或蜂体、房壁上有无蜂螨。

¤  轻轻提出卵虫脾,检查卵虫是否日龄一致,整齐成片,检查幼虫的体色、光泽,检查幼虫的体态。有无病死幼虫及死虫碎片等。

 

 

成蜂大蜂螨寄生检查

¤  方法一 取一250毫升的广口烧杯,倒扣在一张白纸上,从巢脾中间抓取100只蜜蜂放入其中,然后将浸有乙醚的棉球放入烧杯内,10分钟后,检查有无大蜂螨。

¤  方法二 取200毫升广口瓶,倒入100毫升75%医用酒精,从巢脾中间取100只蜜蜂放入其中,用玻棒轻轻搅动,5分钟后,检查有无大蜂螨。

 

 

蜜蜂检疫现场诊断

美洲幼虫腐臭病特征

¤  一般为5-6日龄幼虫发病,死亡幼虫呈茶褐色,有粘性,用小棍挑取,可拉成丝,干枯后的尸体常伸展躺于巢房的斜下方,很难清除。

欧洲幼虫腐臭病特征

¤  主要是3-4日龄以下的小幼虫感病、死亡,死亡幼虫初为苍白色,后变成黄至深褐色,干后很容易被清除。

大蜂螨病特征

¤  子房有穿孔,死亡幼虫为黑色,幼蜂翅卷曲或残缺,有的在蜂箱外的场地上爬行,蜂体或封盖子房可见大蜂螨。

小蜂螨的危害症状

¤  小蜂螨主要寄生在子牌上,很少出现在巢牌外的蜂体上。寄生主要对象是封盖后的老幼虫和蛹。它们靠吸食幼虫和蛹体汁液进行繁殖,经常造成幼虫无法化蛹,或蛹体腐烂于巢房。幸而出房的幼蜂也是残缺不全。受危害幼虫,其表皮破裂,组织化解,呈乳白色或浅黄色,但无特殊臭味。由于小蜂螨发育期短,有的新成螨会咬破房盖转房再行繁殖危害,从而使房盖会出现形如缝衣针孔状大小的穿孔。

¤  小蜂螨繁殖速度比大蜂螨快,造成烂子也比大蜂螨严重,若防治不及时,极易造成全群烂子覆灭。

白垩病特征

¤  主要为封盖幼虫死亡,死亡幼虫初为白色,逐渐变成灰色至黑色。虫体干枯后变成质地疏松似白垩状,表面覆盖白色菌丝。

蜜蜂孢子虫病特征

¤  蜜蜂消化道机能失常,病蜂不安、虚弱,个体瘦小,头尾发黑并下痢。病蜂在框梁上或巢门外虚弱地爬行。箱外场地上可见较多死蜂。蜜蜂中肠苍白色、无光泽,失去弹性,环纹消失。

 

 

现场检疫诊断如有可疑不定的,进一步做实验室鉴定。

检疫结论及处理

¤  11.1 在蜜蜂检疫中,检出蜜蜂检疫对象病,按《中华人民共和国动物防疫法》及相关法规处理。

¤  11.2在蜜蜂检疫中,未检出蜜蜂检疫对象病,出具蜜蜂检疫合格证书。

¤  11.3检疫费按蜂场实际蜂群数计,标准按国家物价局规定执行。

¤  11.4 检疫人员将检疫结果及处理意见登记备案。发现重大蜜蜂疫情,要及时反馈给当地畜牧部门,并报上级主管部门。

 

发现蜜蜂病害疫情

¤  蜂农主动申报:一旦发现蜜蜂疫情,要向当地畜牧部门报告,争取他们的帮助,防止向其他蜂场扩散。

¤  政府部门调查检疫

 

蜜蜂病样的采集和运送

¤  包装容器:清洁无菌的玻瓶、塑料瓶、保鲜塑料袋等。

¤  病样种类:病死蜂(工蜂、雄蜂、蜂王),病死幼虫(脾),病死蛹(脾);可疑蜂蜜(花蜜),可疑花粉(蜂粮);可疑水源等。

¤  储存运送:蜜蜂病样必须在冷冻下保存和运送。防止蜜蜂病样腐败和杂菌污染,影响对蜜蜂病原的检测。

 

蜜蜂病样送达单位

¤  县级畜牧兽医部门

¤  有关蜜蜂病虫害检测研究单位。如中国农业科学院蜜蜂研究所(北京香山)、福建农林大学蜂学院(福州金山)等

 

发布和通报蜜蜂病害疫情

¤  政府主管部门发现疫情后,通过各种形式发布和通报蜜蜂疫情。

¤  养蜂者在转地前,有权向有关部门了解转地放蜂目的地的蜜蜂疫情。

¤  蜂场到达目的地后一定要到当地畜牧主管部门报到,以便一旦发现疫情,主管部门可以及时通知,消毒销毁,以及得到相应的补赏。

 

疫区封锁

¤  某地一旦发现重大蜜蜂疫情,当地政府根据相关法律法规有权发布疫区封锁令,对疫区进行封锁。即控制蜜蜂及可能带蜜蜂病害的人和物进出疫区。

 

捕杀蜜蜂及相关物品消毒销毁处理

¤  发现重大蜜蜂疫情,政府将对患病蜜蜂进行扑杀。并对蜂箱、巢框脾进行消毒和销毁。

 

解除封锁与蜜蜂放行

¤  重大蜜蜂疫情消除后,当地政府发布疫区解除封锁令,蜂群病害治愈后,由当地蜜蜂检疫部门检疫合格后,出据蜜蜂检疫合格证书,蜂群才能转地运输。

 

 


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